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[发明专利]一种包涵体蛋白的复性方法及用途-CN202211508289.9在审
发明人：杜新永;刘长太;李纪兆;陈磊;李晓娟 -专利权人：青岛润达生物科技有限公司
申请日： 2022-11-28 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C07K1/113 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种包涵体蛋白的复性方法及用途。一种包涵体蛋白的复性方法，包括：将包涵体蛋白溶于NTA Buffer溶液中，超声促进杂蛋白的溶解；用6 M的盐酸胍溶液溶解包涵体蛋白，将溶解的包涵体蛋白用3M的盐酸胍进行2倍体积稀释，逐滴滴入复性液进行复性48 h；利用PEG 20000将复性后的液体进行100倍浓缩即可得到可溶性蛋白。本发明采用蛋白复性的方法将表达量较高的包涵体蛋白进行纯化、溶解和复性，得到纯度较高的可溶性蛋白，能保证抗原的有效性。
一种包涵蛋白复性方法用途

[发明专利]包涵体蛋白的复性方法-CN202310122826.4在审
发明人：修朝阳;张强;陈英华;高强;郑保富 -专利权人：合肥欧创基因生物科技有限公司
申请日： 2023-02-16 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C07K1/16 文献下载
摘要：本发明公开了包涵体蛋白的复性方法，涉及生物医药技术领域。本发明包括如下步骤：S1：获取包涵体，包涵体洗涤、溶解、过滤，获得含有包涵体蛋白的变性液；S2：蛋白纯化；S3：蛋白浓缩；S4：透析；S5：分子筛柱对透析液洗脱纯化，得到复性蛋白。解决现有的包涵体复性方法操作繁琐，易形成无活性聚集体的问题。本发明公开的复性方法针对二硫键小于等于2个的蛋白进行复性，具有复性效率高、适用于大多数的包涵体蛋白的优点。
包涵蛋白复性方法

[发明专利]一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法-CN202211453847.6在审
发明人：朱克骏;肖文俊;陈京生;王世玲;屈帅杰;来晓东;江秋虹;陶立峰 -专利权人：安徽智飞龙科马生物制药有限公司;重庆智飞生物制品股份有限公司;北京智飞绿竹生物制药有限公司
申请日： 2022-11-18 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法，通过在包涵体复性液中添加精氨酸提高复性后蛋白的稳定性，同时，调整稀释复性中的精氨酸浓度、静置时间、浓缩倍数等工艺参数，进一步提升变性包涵体蛋白的复性效果，提高所述方法中变性包涵体蛋白复性得率和最终蛋白得率
一种重组蛋白包涵复性纯化方法

[发明专利]一种重组人IL2包涵体纯化复性方法-CN202211371272.3在审
发明人：李昆鹏;易红飞;高宇;陈颖;陈金林 -专利权人：武汉翌圣生物科技有限公司
申请日： 2022-11-03 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C07K14/55 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人IL2包涵体纯化复性方法，其步骤包括：收集大肠杆菌表达的人IL2包涵体蛋白并洗涤；用缓冲液E溶解包涵体蛋白，向溶解的包涵体蛋白中加入缓冲液F稀释包涵体蛋白，离心收集沉淀；用缓冲液G重新溶解包涵体蛋白；人IL2包涵体蛋白柱上复性：用缓冲液H平衡Q柱，将获得的人IL2包涵体蛋白上样；缓冲液H洗杂；100％缓冲液I到100％缓冲液J的浓度梯度过柱复性，缓冲液K进一步柱上复性；100％缓冲液L到100％缓冲液M的浓度梯度线性洗脱；将洗脱后的人IL2复性蛋白透析，超滤浓缩，得到成品。本发明方法可以有效提高人IL2包涵体复性效率，采用本发明的方法，其包涵体复性效率达到60％。
一种重组 il2 包涵纯化复性方法

[发明专利]一种大肠杆菌包涵体复性的方法-CN201010139322.6无效
发明人：王志超 -专利权人：上海瑞基生物科技有限公司
申请日： 2010-04-02 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明涉及涉及的是生物工程下游蛋白质纯化领域，具体涉及大肠杆菌蛋白表达形成包涵体的复性方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：(1)包涵体蛋白的收集，4℃ 5000rpm/min 6min离心收集菌体，将菌体超声破碎，4℃ 8000rpm/min 30min高速冷冻离心得到P003B蛋白包涵体；(2)包涵体的纯化，重悬包涵体于50mL洗涤缓冲液，溶解杂蛋白及其他杂质从而纯化P003B包涵体；(3)包涵体复性，在4℃，溶解的包涵体通过恒流泵，用复性缓冲液，缓慢稀释至缓冲液pH为8.0，并不断搅拌，本发明与现有技术相比，温和溶解方法保留了在包涵体形成过程中形成的蛋白质二级结构，提高了包涵体复性的效率，简化了复性的步骤，节约了时间，从而大大降低了重组蛋白生产的费用。
一种大肠杆菌包涵复性方法

[发明专利]一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法-CN201910237696.2有效
发明人：雍金贵;张伦 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2019-03-27 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法，采用温和的变性方法溶解包涵体蛋白，保护包涵体蛋白中原有的二级结构不被破坏将大大有利于包涵体蛋白的复性；该方法集合了稀释及透析进行蛋白复性的方法，第一次稀释降低变性剂浓度，促进蛋白复性，第二次稀释降低添加剂浓度，使蛋白更容易适应基础缓冲液的环境，最后进行透析去除各种添加剂，可以得到复性效率高，浓度高的复性后蛋白。
一种包涵蛋白稀释透析复性方法

[发明专利]新型冠状病毒重组蛋白包涵体的复性方法-CN202010243691.3在审
发明人：谢朋辉;贺建望;李明明;吴云;邵月 -专利权人：艾柏森（江苏）生物科技有限公司
申请日： 2020-03-31 - 公布日： 2020-07-17 - 主分类号： C07K1/113 文献下载
摘要：本发明公开一种新型冠状病毒重组蛋白包涵体的复性方法。本发明提供的新型冠状病毒重组蛋白包涵体的复性方法，通过将变性后的包涵体溶解产物过镍螯合柱后使用含变性剂且变性剂浓度梯度降低的复性液在常温下进行梯度洗脱来进行流动复性，不仅降低了成本，还显著缩短了新型冠状病毒重组蛋白包涵体复性所需要的时间，有利于在短时间以较低成本大规模对新型冠状病毒重组蛋白包涵体进行复性，且蛋白的回收率高、纯度高、稳定性强，有助于在短时间以较低成本获得大量高质量的新型冠状病毒蛋白用于新型冠状病毒检测和抗体制备。本发明提供的新型冠状病毒重组蛋白包涵体的复性方法适用于新型冠状病毒RBD重组蛋白包涵体或新型冠状病毒N重组蛋白包涵体的复性。
新型冠状病毒重组蛋白包涵复性方法

[发明专利]一种溶解包涵体蛋白的方法-CN201410070556.8有效
发明人：熊思东;齐兴梅 -专利权人：苏州大学
申请日： 2014-02-28 - 公布日： 2014-06-04 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明一种溶解包涵体蛋白的方法，将表达包涵体蛋白的菌体离心收集，离心菌体用PBS重悬，加入溶菌酶室温1-3小时后经超生破碎，然后离心弃掉上清得到包涵体蛋白沉淀；将所述的包涵体蛋白沉淀重悬于IBbuffer中，然后离心，弃掉上清，重复1-6次洗涤包涵体蛋白；用含有尿素的PBS重悬洗涤后的包涵体蛋白；然后将包涵体蛋白悬液冷冻；将冷冻的包涵体蛋白悬液置于室温，缓慢溶解，然后离心，上清即为可溶的包涵体蛋白。本发明的方法操作简单，得到的包涵体蛋白溶液含有较低浓度的变性剂，简化了复性步骤，节约了时间，提高了蛋白复性效率。
一种溶解包涵蛋白方法

[发明专利]大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法-CN202010854423.5有效
发明人：崔玉东;肖雪 -专利权人：黑龙江八一农垦大学
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C07K14/245 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)诱导表达的rOmpA包涵体蛋白沉淀的收集；(2)rOmpA包涵体蛋白用8M尿素溶液变性；(3)用含15mMβ‑环糊精、pH8.5的100mM Tris‑HCl缓冲液进行5倍稀释复性；(4)复性的rOmpA亲和层析纯化；(5)纯化的rOmpA置透析袋中，于pH7.6的PBS缓冲液中4℃透析12h以上，离心后收集上清，即获得纯化的复性rOmpA蛋白。本发明对表达的rOmpA包涵体蛋白进行复性和纯化，可获得纯度高达95％的可溶性rOmpA蛋白；本发明使用的复性方法简便快捷，有效解决了大肠杆菌rOmpA包涵体蛋白的复性纯化问题，为大规模生产利用rOmpA
大肠杆菌重组膜蛋白包涵蛋白复性纯化方法

[发明专利]一种蛋白包涵体及重组人β-神经生长因子的制备方法-CN201910390559.2有效
发明人：李树刚;张伟;王传胜;邓永康;龚会英;柴新娟;但国平;程丹凝;余英鹏 -专利权人：重庆科润生物医药研发有限公司
申请日： 2019-05-10 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种蛋白包涵体及重组人β‑神经生长因子的制备方法，对含肠激酶酶切位点的重组人β‑神经生长因子前体蛋白的包涵体进行色谱复性，得到复性前体蛋白，即蛋白包涵体；对复性前体蛋白进行肠激酶酶切，得到酶解产物本发明将色谱法应用到rhpro‑NGF包涵体复性中，相比于传统的稀释复性方法，显著提高复性率，缩短复性时间，使后续纯化更简单，获得结构正确高纯度产品，能够减少蛋白质互相聚集的机会，打破复性变性反应平衡，使复性反应持续进行，以较高的蛋白复性浓度进行，便于去除变性剂，集成复性与纯化过程，可以实现自动化、规模化，层析介质可以重复使用，降低工艺成本，更利于将来产业化的大规模生产。
一种蛋白包涵重组神经生长因子制备方法

[发明专利]疏水性包涵体抗原蛋白的复性方法-CN202210414590.7在审
发明人：何家敏;武云波;林育佳;孟莎;游梅香;刘晓婷;陈禄凤 -专利权人：深圳重链生物科技有限公司
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明公开了包涵体抗原蛋白的透析复性方法，尤其是疏水性包涵体抗原蛋白的透析复性方法，具体地，本发明公开了在包涵体的透析复性过程中引入了高温透析步骤，进而得到纯度高、单位活性高、稳定性显著增加、溶解度好的目标蛋白
疏水包涵抗原蛋白复性方法

[发明专利]一种用于包涵体蛋白复性的复性缓冲液以及方法-CN202211496885.X在审
发明人：伍波;董晓宁;尹美移;沈晨光;蒋宇珊;吴智广;李超辉;朱瀛 -专利权人：天津鸿宇泰生物科技有限公司
申请日： 2022-11-25 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C07K1/113 文献下载
摘要：本申请涉及用于包涵体蛋白复性的复性缓冲液以及方法。所述复性缓冲液包括20~50mM的Tris‑HCl，50~150mM的NaCl，0.5~1.5M的L‑精氨酸，0.5~1wt%的β‑环状糊精和0.05~5wt%的去污剂，且pH值为8~9。本申请所述复性缓冲液中同时包括β‑环状糊精和去污剂，二者能够发挥协同作用，进而使得利用所述复性缓冲液对包涵体进行蛋白复性时能够显著提高包涵体的复性效果，更利于变性蛋白质折叠为天然活性蛋白质。另外，利用所述复性缓冲液对包涵体进行复性的操作简单，成本低，重组蛋白产量高。
一种用于包涵蛋白复性缓冲液以及方法

[发明专利]一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法-CN201310218483.8无效
发明人：王朋;赵林萍;鲁龙;李慧英;任宝红;王军;苗银萍;王真;孙帅领;张如民;曾小宇 -专利权人：郑州中道生物技术有限公司
申请日： 2013-06-04 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C07K14/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法，将表达包涵体蛋白的菌株离心收集，洗涤后，用BufferA进行重悬，接着用超声波或液压破碎仪破碎至清亮，经过适当离心后获得包涵体蛋白，用适当浓度的SKL溶解后，再用氧化型谷胱甘肽和还原性谷胱甘肽溶液进行处理，最终纯化复性的蛋白。本发明方法操作简单，提高了包涵体复性效率，简化了复性步骤，节约了时间并减少了操作人员的工作量，所得蛋白质纯度较高并且具有生物学活性。
一种大肠杆菌表达包涵蛋白纯化复性方法

[发明专利]一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法-CN201610153001.9有效
发明人：冷春生;李一奎;魏宏壮;常晓慧 -专利权人：通化东宝药业股份有限公司
申请日： 2016-03-17 - 公布日： 2017-08-25 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，属于蛋白纯化领域，包括以下步骤1)破碎表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌菌体，收集包涵体；2)洗涤包涵体，然后使包涵体溶解、融合蛋白变性；3)蛋白复性步骤；本方法不需预先的蛋白纯化步骤，直接进行蛋白复性，最后收获高浓度的具有天然结构的重组胰岛素原融合蛋白，克服现有技术中，蛋白复性后蛋白浓度低，易发生蛋白聚集沉淀的缺陷，复性率提高至80％‑90％，提高生产效率
一种重组胰岛素融合蛋白复性方法

[发明专利]一种利用GEM纯化包涵体的方法-CN201810897135.0在审
发明人：周志江;赵芳坤;杜仁鹏;韩烨;肖华志;宋巧智;曹硕 -专利权人：天津大学
申请日： 2018-08-08 - 公布日： 2019-01-11 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用GEM纯化包涵体的方法，构建重组蛋白与AcmA融合蛋白表达载体，诱导表达得到重组蛋白大部分以包涵体形式存在，利用8M尿素溶解包涵体，利用GEM将溶解的重组蛋白从尿素中吸附分离，然后进行复性该方法可以利用简单易得的GEM从尿素溶解的包涵体中分离纯化带有AcmA的重组蛋白，并且具有良好的蛋白回收效率，同时可以简化包涵体复性过程，简化操作，降低酶活损失。
包涵体重组蛋白尿素溶解包涵体复性表达载体蛋白回收分离纯化融合蛋白诱导表达复性构建酶活吸附尿素溶解

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